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酶標(biāo)儀(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)是一種常用的生物化學(xué)分析技術(shù),用于檢測和測量樣品中的特定物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、抗原、抗體等)的存在和濃度。它的用途廣泛,包括醫(yī)學(xué)診斷、生物學(xué)研究、食品安全監(jiān)測等領(lǐng)域。
酶標(biāo)儀的工作原理基于酶的催化作用和免疫反應(yīng)原理。下面是酶標(biāo)儀的基本工作原理:
1. 固定:首先,在試驗板或試管的表面上涂覆目標(biāo)物質(zhì)(如抗原或抗體)。這樣,當(dāng)樣品中的特定物質(zhì)與其相結(jié)合時,它們將被固定在試驗板或試管的特定位置上。
2. 結(jié)合:接下來,將待測樣品加入試驗板或試管中,樣品中的特定物質(zhì)(如抗體)與固定在試驗板上的目標(biāo)物質(zhì)(如抗原)發(fā)生特異性的結(jié)合。
3. 洗滌:為了去除未結(jié)合的物質(zhì),需要進(jìn)行洗滌步驟。洗滌液通過試驗板或試管,將未結(jié)合的物質(zhì)洗掉,只留下特異性結(jié)合的物質(zhì)。
4. 檢測:然后,加入與待測物質(zhì)特異性結(jié)合的酶標(biāo)記反應(yīng)物(如辣根過氧化物酶-HRP),它與特異性結(jié)合的物質(zhì)結(jié)合在一起。
5. 底物添加:加入底物,底物被酶標(biāo)記反應(yīng)物催化,產(chǎn)生可測量的信號。常見的底物是類似于四氫吡啶-2-酮(TMB)的物質(zhì),它與HRP催化反應(yīng)后會產(chǎn)生藍(lán)色或黃色的產(chǎn)物。
6. 反應(yīng)停止:在發(fā)生足夠的顏色反應(yīng)后,通過添加停止液(如硫酸或酸性溶液)停止酶催化反應(yīng)。
7. 讀取:*后,使用酶標(biāo)儀測量反應(yīng)產(chǎn)物的光密度或顏色。光密度或顏色的強(qiáng)度與待測物質(zhì)的濃度成正比,通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,可以確定待測樣品中目標(biāo)物質(zhì)的濃度。
總結(jié)起來,酶標(biāo)儀通過特異性結(jié)合、酶催化和光密度或顏色測量等步驟,實現(xiàn)了對待測物質(zhì)的檢測和測量。它的工作原理簡單而靈敏,使其成為許多生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中重要的實驗技術(shù)。
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